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TGFβ1及TNF-α与慢性乙型肝炎合并非酒精性脂肪肝关系的研究.pdf

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转化生长因子Β1 HEPG2215 脂肪变性
资源描述:
乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个严重的公共卫生问题。随着人们生活水平的提高,脂肪肝的发病也越来越普遍,尤其是近年来,由于非酒精性脂肪肝 (nonalcoholic fatty liverdisease,NAFLD)的发病率逐年增加,导致慢性乙型肝炎(chronic virAlhepat it is B,CHB)与肝细胞脂肪变性合并存在的病例明显增多,而乙肝病毒感染和脂肪肝之间的关系及相互影响国内外报道较少,因此受到众多学者的关注。众所周知,一些慢性肝病如慢性乙型、丙型肝炎病毒感染、肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)及NAFLD 均和机体的免疫状态有关。本课题拟从与慢性乙型肝炎和NAFLD 均有密切关系的两个细胞因子着手,来探讨慢性乙型肝炎与NAFLD 之间的关系及相互影响。
   有研究发现,在非酒精性脂肪肝组织中转化生长因子β(transforming growth factorβ1,TGFβ1)及其受体表达增加,在肝脏脂质代谢障碍引发脂肪肝进程中肿瘤坏死因子(tumornecrosis fator Altha,TNF-α)也扮演了重要角色。本课题通过比较慢性乙型肝炎合并NAFLD与单纯慢性乙型肝炎患者血浆中TNF-α、TGFβ1的变化,分析TNF-α、TGFβ1对慢性乙型肝炎合并NAFLD作用,为临床慢性乙型肝炎合并NAFLD患者的转归、治疗提供科学的理论依据。本论文共分两个部分。第一部分:临床研究部分,主要是观察慢性乙型肝炎合并NAFLD患者血清中TNF-α、TGFβ1水平;第二部分:细胞实验部分,包括两个实验,实验一:诱发HepG2.2.15细胞脂肪变性模型的构建,实验二:TGFβ1对脂肪变性的HepG2.2.15细胞内TG、ALT的影响。
   实验一:诱发HepG2.2.15细胞脂肪变性模型的构建
   第一部分:临床研究部分慢性乙型肝炎合并NAFLD患者血清TGFβ1及TNF-α水平检测
   目的:观察CHB 合并NAFLD患者和CHB患者血清TGFβ1、TNF-α的水平并探讨其与CHB 合并NAFLD的关系。方法:收集CHB 合并NAFLD90例和CHB患者47例,根据腹部CT肝/脾CT 比值将脂肪肝分为轻、中、重度三组。采用ELISA 法检测血清TGFβ1、TNF-α的浓度。结果:CHB 合并NAFLD组血清TGFβ1、TNF-α的浓度均明显高于对照组(P<0.001、P<0.001),TGFβ1、TNF-α浓度随脂肪肝程度的加重而逐渐增高,且在CHB 合并NAFLD组中两者存在相关性。结论:① TGFβ1、TNF-α在CHB 合并NAFLD的发病机理中有一定的临床意义。②在CHB 合并NAFLD患者中,TGFβ1及TNF-α的血清浓度的高低与其脂肪肝的程度存在密切关系。
   第二部分:细胞实验部分实验一诱导HepG2.2.15细胞脂肪变性模型的构建
   目的:建立乙型肝炎合并脂肪变性的细胞模型。方法:分别应用不同浓度的油酸作用于肝癌细胞HepG2.2.15,建立乙型肝炎合并脂肪肝的细胞模型。采用油红O-苏木素染色观察油酸处理后细胞内脂肪滴变化情况。结果:0.05mM、0.10mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM浓度的油酸在作用于肝细胞24h、48h、72h后,均可造成肝细胞内脂质代谢紊乱。油红O-苏木素染色后光镜下显示,在细胞内出现明显的脂质堆积,橘红色脂肪滴数量明显增多;随油酸浓度的升高和作用时间的延长,细胞内的脂质堆积的越多,橘红色脂肪滴数量也明显增多。0.2mM 油酸作用72h时肝细胞脂肪变性最明显。结论:0.2mM 油酸作用72h可诱导HepG2.2.15 脂肪变性,从而成功建立乙型肝炎合并脂肪肝的细胞模型。
   实验二 TGFβ1对脂肪变性的HepG2.2.15细胞TG、ALT的影响
   目的:通过观察TGFβ1对合并脂肪变性后的肝癌细胞HepG2.2.15细胞脂肪变性指标的影响,了解其是否加重感染乙肝病毒后肝细胞脂肪变性的程度及肝细胞损伤程度。方法:将HepG2.2.15细胞分为三组,第一组为单纯油酸组(0.2mM);第二组为油酸(0.2mM)+TGFβ1组:TGFβ1浓度为10ng/ml;第三组为空白对照组。加入各处理因素,作用72小时后,油红O-苏木素染色观察HepG2.2.15细胞脂肪滴的变化情况;用反复冻融法裂解细胞,全自动生化分析仪测定细胞内的TG的含量;用全自动生化分析仪检测细胞外培养基中的ALT的含量。结果:①油红O-苏木素染色后光镜下显示,与单纯油酸组相比,油酸+TGFβ1橘红色脂肪滴数量明显增多;②单纯油酸组HepG2.2.15细胞内TG含量比值明显高于正常对照组(P<0.001),油酸+TGFβ1组TG 含量明显比单纯油酸组高(P<0.001);③单纯油酸组的细胞外培养基中ALT 明显高于空白对照组(P<0.001),油酸+TGFβ1组细胞外培养基的ALT 明显比单纯油酸组高(P<0.001)。结论:TGFβ1可进一步造成由油酸诱导的肝细胞脂肪变性模型的脂质堆积增加和细胞外基质中的ALT 增加从而加重HepG2.2.15细胞脂肪变性程度。
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在线出版: 2011/11/30 0:00:00

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