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华支睾吸虫CsSCCRO基因的发现及其功能初步研究.pdf

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华支睾吸虫 CSSCCRO基因 免疫原性 基因克隆 细胞生物学功能
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中山大学硕士学位论文华支睾吸虫CsSCCRO基因的发现及其功能初步研究姓名:赵玉利申请学位级别:硕士专业:病原生物学指导教师:余新炳20060401赵玉利硕士学位论文中文摘要尽管有充分的证据表明,华支睾吸虫的感染是引发肝胆管癌的一个重要因素,但是至今仍缺乏明确的分子水平的实验证据;另一方面,华支睾吸虫是否存在与人鳞状上皮癌肿瘤相关基因相类似的基因,是否也具有与其相类似的作用都值得进一步探讨。研究目的从华支睾吸虫成虫cDNA文库中筛选出与人鳞状上皮癌肿瘤相关基因相类似的基因,探讨其与肝胆管癌发生、发展的关系,为华支睾吸虫感染引起肝胆管肿瘤提供分子生物学依据,同时丰富华支睾吸虫基因组学和功能基因组学研究。研究方法l华支睾吸虫CsSCCRO基因的发现和生物信息学分析从华支睾吸虫成虫cDNA文库测序后unigene归并、拼接,获得与人鳞状上皮癌相关肿瘤基因相类似的基因,暂命名为CsSCCRO。测序、分析是否为全长基因,然后利用生物信息学分析软件对此基因的cDNA序列进行结构、性质和功能分析,包括核酸水平和氨基酸水平的同源性分析、以及推导的DsccRO蛋白的理化性质及空间结构分析。2华支睾吸虫CsSCCRO基因克隆、表达和Western—blotting鉴定21华支睾吸虫成虫CsSCCRO基因的扩增、克隆根据目的基因的ORF和原核表达质粒pET30a()设计引物,PCR扩增CsSCCRO基因的cDNA全长编码区。限制性内切酶XhoI、EcoRV双酶切空质粒pET30a()矛DPCR产物,T4连接酶连接。用PCR、酶切及测序鉴定。22华支睾吸虫成虫CsSCCRO基因的表达和纯化将pET30a()一CsSCCRO重组质粒转化的大肠杆菌BL21中表达,IPTG诱导后超声裂解破碎,最后用Ni—NTAAgarose蛋白纯化柱纯化目的蛋白,核酸蛋白定量分析仪DU530(Beckman)NU浓度。23华支睾吸虫成虫CsSCCRO蛋白的Western—blotting鉴定
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本文标题:华支睾吸虫CsSCCRO基因的发现及其功能初步研究.pdf
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编号: 20190319133508227

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在线出版: 2007/7/2 0:00:00

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