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根癌农杆菌介导的中国石竹遗传转化体系的建立及几丁质酶基因的导入.pdf

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中国 石竹 根癌农杆菌 几丁质酶基因 遗传转化 石竹叶斑病
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西南大学硕士学位论文根癌农杆菌介导的中国石竹遗传转化体系的建立及几丁质酶基因的导入姓名:陈旭申请学位级别:硕士专业:细胞生物学指导教师:李名扬20060601Agrobacterium—mediatedtransformationofDianthuscMnensisandregenerationoftransgenicplantscontainingthemaizechitinasegeneCandidate:ChenXnAdvisor:ProfLiMingyang(CollegeofHorticultureandLandscapeEngineeringSouthwestUniversity,Chongqing400716,China)AbstractRainbowpink(Dianthuschinensis)isanativeplantinChinaandisoneoftheimportmantmembersofgroundcoverplantButitissusceptibletoSeptoriaspwhencultivatedinwetandwarmenvironmentChitinasewasinducedbytheinfectionoffungalaSadefenseresponseonplantsAlthoughplantsdonotproducechitinmostfungicontainchitinasamajorcomponentoftheircellwalls,ChitinasecaninhibitthegrowthoffungalpathogenTheapplicationofchitinaseplaysanimportantroleingeneticengineeringofplantresistancetodiseasesrecentlyManytransgenicplantsdemonstratedsignificantlyhigherlevelsofresistancetodiseasesthancontrolInthisstudyatransformationsystemviaAgrobacteriumtumefacienceswasfirstlyestablished,andwewanttoobtainChitinasegenemodifiedrainbowpinkwhichCanresistfungibyusinggeneticengineeringtechnologyTheresultsareasfollowing:1RegenerationsystemsofleavesThesecondandthirthpairsofleaveswereusedforexplantpreparationTheleaveswerecutintoO,5cmorSOinlen垂handpreculturedonMSl(MSI0rag/L2,4一DOImg/LBA)for3~4dwiththeirabaxialsurfaceOnthemediumSubsequentlyexplantsNeretransferredtoMS2(MS10meCLBA十03mg/LNAA)Shooswereformedatafrequencyof683%2AtumefaciencesmediatedtransformationsystemofleavesItwasstudiedthatseveralfactorsaffectedgenetictransformationofrainbowpink(Dchinensis)bypBtl21/LBA4404TheoptimizedconditionWR5that:leavessegmentsfromthesecondandthiffhpairswereprecutturedonMSIfor3—4dwiththeirabaxialsurfaceonthemediumThe爿tumefaceinscellswhichOD600comesupto05orsowerecollectedbycentrifugationandresuspendedinsamevolumeofliquidMScontaining100umol/LASTheleavessegmentsweretransferredintoA,“坍efaeeinssuspensionasdescribedabovefor6~8minAftertheAtumefaceinscellsOffthesurfaceofleavessegmentswereremoved,theexplantswerethenplacedonafilterpaper
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在线出版: 2007/5/23 0:00:00

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