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    • 简介:表皮蜡质的合成过程分为酰基还原和脱羰基两个途径,其中CER4、WSD1基因参与了酰基还原途径,MAH1基因参与了脱羰基途径。本文以红星苹果(MALUSDOMESTICABKHCVSTARKRING)作为实验材料,克隆了MDWSD1、MDMAH1和MDCER4基因,预测了其生物学功能;研究了其在苹果发育期和贮藏期的表达模式,检测了发育期和贮藏期苹果蜡质成分和含量的变化;通过1甲基环丙烯(1METHYLCYCLOPROPENE,1MCP)和乙烯利(ETHREL,ETH)处理,研究了采前和采后乙烯调控对MDWSD1、MDMAH1、MDCER4基因表达的影响。主要结果如下1、克隆了MDWSD1、MDMAH1、MDCER4基因片段的序列,长度分别为578BP、500BP和509BP,然后通过与苹果基因组数据库比对,获得三种目的基因的全长序列。生物学信息分析表明MDWSD1基因序列全长2622BP,其蛋白具有WESACYLTRANSF和ACYLWSDGAT两个蛋白保守区,前者编码蜡质合成酶酰基COA转移酶,后者编码酰基转移酶;MDMAH1基因序列全长2148BP,其蛋白具有PLN03195、P450、CYPX和PTZ00404四个蛋白保守区,第一个保守区编码脂肪酸Ω脱氢酶,其余的均与细胞色素P450区域有关;MDCER4基因序列全长1620BP,其蛋白具有FARN_SDR_E和PLN02996两个保守区,编码脂酰辅酶A还原酶。2、在苹果发育期,果实表皮蜡质质量分布密度在采前60D~7D逐渐升高,在采前7D~0D则会快速下降,与发育期MDWSD1基因相对表达量的变化趋势一致;采前7D~0D时酯类含量明显下降,表明MDWSD1基因可能与表皮蜡质中酯类合成密切相关。在苹果贮藏期,果实表皮蜡质质量分布密度整体呈逐渐上升的趋势,其中酯类和醇类成分含量在贮藏0D~120D内增加相对明显;MDWSD1、MDMAH1和MDCER4基因在贮藏30D~90D期间的相对表达量处于相对较高的水平,且与酯类、醇类含量的变化趋势基本一致;该结果表明MDWSD1、MDMAH1和MDCER4三种基因可能通过调控酯类和醇类的合成影响了表皮蜡质含量。3、对采前ETH和1MCP处理的苹果表皮蜡质合成基因表达的变化研究发现MDWSD1基因受乙烯正调控,乙烯对MDMAH1和MDCER4基因的调控无明显规律。与CK相比,ETH促进了酯、醛、烷和醇类物质含量的增加,1MCP处理则抑制了这些蜡质成分的增加,这与三种处理下苹果表皮蜡质质量分布密度的变化规律一致。4、对采后ETH和1MCP处理的苹果表皮蜡质合成基因表达的变化研究发现MDWSD1和MDCER4基因受乙烯正调控,乙烯对MDMAH1基因的调控无明显规律。与CK相比,ETH促进了贮藏期MDWSD1和MDCER4基因的表达,加快了红星苹果表皮蜡质含量的上升,而1MCP处理抑制了MDWSD1和MDCER4基因的表达,减缓了红星苹果表皮蜡质含量的上升。该结果表明乙烯通过对MDWSD1和MDCER4基因表达的正调控,提高了酯类和醇类物质的含量。
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      上传时间:2019-03-28
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    • 简介:红色砂梨(PYRUSPYRIFOLIANAKAI)原产中国云南和四川南部,近年来,以原产云南著名红色砂梨地方品种‘火把梨’为亲本育成的优良品种已在全国各地引种栽培,得到了消费者的广泛认可,市场前景广阔。红色砂梨的相关研究多集中于着色机理上,着色调控方面的研究相对较少,难以满足生产上优质红色砂梨生产的需求。此外,本课题组的前期研究发现红色砂梨不同于西洋梨和苹果的着色规律,因此有必要对红色砂梨着色调控及其相关分子生理机制进行系统研究,为红色砂梨生产中的着色调控技术的开发提供理论支持。本研究以红色砂梨中熟品种‘满天红’和‘美人酥’,晚熟品种‘云红梨1号’为主要试材,系统研究了温度、光照、机械伤和化学药剂等试验处理对红色砂梨着色调控的效应及相关分子生理机制,同时探讨了采收成熟度对诱导红色砂梨着色的影响及相关分子生理机制,主要研究成果如下1、UVB白光诱导条件下,高温27℃诱导红色砂梨品种‘云红梨1号’果皮中花青苷积累的效应显著优于低温17℃,这可能缘于高温较低温果皮具有更高的PAL酶活性以及PYMYB10和结构基因PPPAL、PPCHS、PPANS和PPUFGT的表达水平。2、红色砂梨对UVB白光诱导的响应与苹果较为相似,而与西洋梨有显著差异。不同红色砂梨品种的最佳着色温度和可诱导着色的温度范围均有所不同,红色砂梨‘满天红’和‘美人酥’最佳着色温度分别为17℃和12℃。光强和光质都对红色砂梨着色具有重要影响,高光强有利于红色砂梨着色,UVB和白光在红色砂梨果皮花青苷积累方面具有显著地互作增益效应。基于本研究的结果,我们认为低温和高强度的UVB白光环境有利于获得较佳着色的‘满天红’和‘美人酥’,同时可较好的维持果实内在品质。3、机械伤处理能够有效促进‘满天红’果实在UVB白光诱导条件下受伤部位花青苷的积累,并伴随着该部位果实硬度显著下降,乙烯释放速率显著上升,花色苷合成相关基因PPF3H、PPANS、PPUFGT和PYMYB10表达量的显著上调,而对照果实仅发生了轻微着色,且未检测到乙烯的释放。推测乙烯可能参与了红色砂梨果实花色苷合成的调控,对花色苷合成具有促进作用。机械伤处理可以作为一种有效的研究方法用于果实着色调控机制的研究。4、采收成熟度对诱导红色砂梨着色效应具有重要影响,且这种影响会随着果实临近商业采收期而减弱。成熟度较高果实中更高的花青苷的积累,可能与其果实具有更高的可溶性糖含量以及花青苷相关结构和调节基因尤其是PPCHS,PPF3H,PPANS,PPUFGTPYMYB10和PPBHLH等的高量表达有关。商业成熟期前10D是红色砂梨采后诱导着色的最佳采收期。5、在UVB白光的诱导条件下,不同药剂处理对红色砂梨‘满天红’着色及主要果实品质的调控效应不同。04MMOL。L1ABA和3MMOLL1GA对‘满天红’果皮花青苷合成没有增效2MMOLL1ETH、012MMOLL1GNT和2MMOL。L1MJ处理以及它们混合使用均能促进‘满天红,果皮花青苷著合成,ETH和MJ间还存在显著地互作增益现象,这些处理还能较好地维持果实硬度、可溶性固形物、可溶性糖和有机酸的含量等。6、MJ处理显著提高了红色砂梨‘满天红’果皮中PPCHS2、PPCHI3、PPF3H、PPANS、PPDFR1、PPUFGT1、PPUFGT2和PYMYB10的表达水平,从而促进其果皮中花青苷的积累。曝光处理后,PPBHLH和PPWD40表达在对照中不受诱导,而在MJ处理中出现上调表达现象,推测这两个基因的上调表达也是MJ促进花青苷积累的原因之一。红色砂梨花青苷合成过程中,花青苷合成结构基因不同成员的表达模式和相对表达量的变化存在显著差异,这些成员的功能可能有所不同。
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      上传时间:2019-03-19
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    • 简介:安徽农业大学博士学位论文摘要I摘要美国山核桃CARYAILLINOENSISKKOCH是胡桃科JULACEAE山核桃属CARYANUTT落叶乔木,原产美国密西西比河和墨西哥北部。美国山核桃在新西兰、美国、法国、西班牙、俄罗斯、澳大利亚、日本等国有栽培我国江苏、上海、四川、浙江等南方地区也有一定规模的引种。美国山核桃是一种用途广具有良好经济效应和社会效应,受益时间久且生态效益明显,具有广阔应用前景的优良经济树种。本研究以美国山核桃为材料,对美国山核桃引种安徽的可行性和适应性进行了研究,筛选出适合在安徽省四个生态区域内生长的品种;分析了美国山核桃的光合作用及叶片胞间CO2浓度的日变化,为综合利用和深入开发山核桃资源提供技术保障。为掌握美国山核桃花芽分化机理,采用石蜡切片技术,对其花芽分化过程进行解剖学观察;测定了花芽分化过程中POD酶和SOD酶两种关键酶活性,探讨其变化与花芽分化的关系;同时通过REALTIMEPCR分析花芽分化过程中的重要基因CCLFY的表达情况,为研究美国山核桃成花机理和花芽分化机理奠定基础。主要结果如下1、引种的23个美国山核桃品种在不同试验地中品种保存率不同,合肥和含山试验地中品种保存率较高,枞阳试验地次之,潜山县最低。在相对一致的栽培管理水平下,美国山核桃株高、径生长量在不同试验地中的差异不显著,不同品种间生长量均值差异显著(P005)。研究表明,通过比较安徽地区的四个地区的美国山核桃的年生长量,由高到低依次为含山、合肥、枞阳和潜山。在所有引种品种中,合肥试验地的MAGENTACSV1714生长量最高;含山试验地生长量较大的品种为ELLIOTT;枞阳试验地生长量较大的品种为SDLINGCSV36和SDLINGCSV1510;潜山试验地生长量较大的品种SDLINGCSV1314,SDLINGCSV105,FKERTCSV55。不同试验地中美国山核桃果实性状及结实产量不同,不同品种间亦存在差异。合肥试验地较好,枞阳试验地次之,含山试验地最差。其中,合肥试验地中果实性状及结实量较好的品种为3,4号,即JAMES,MAGENTACSV1714;含山试验地中果实性状及结实量较好的品种为2号,即ELLIOTT;枞阳试验地中果实性状及结实量较好的品种为4,22号,即MAGENTACSV1714,MOE。结合品种出苗率、移植后存活率、生长量和果实性状和结果率,我们认为MAGENTACSV1714适合合肥地区种植,ELLIOTT适合含山地区种植,MAGENTACSV1714种植和MOE适合枞阳地区种植,SDLINGCSV105适合潜山地区种植。2、美国山核桃品种MAGENTACSV1714在生长过程中光合速率全天的日变化除早、晚低温情况下以及中午高温“午休现象”下光合速率较低外,其他时间段均具有
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      上传时间:2019-03-18
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    • 简介:分类号河南农业大学硕士学位论文论文题目密级英文题目TRANSFORMATIONOFTUNISIASOFTSEEDPOMEGRANATETUMEFACIENS导专论文提交日期学位授予日期致谢本课题研究是在导师陈延惠教授的悉心指导下完成的,从论文的选题、设计,试验材料的准备、研究方案的设计实施及论文的撰写,都倾注了导师陈老师的大量心血。恩师渊博精湛的学识造诣和学术思想、渊博的理论知识与实践经验、严谨和求实创新的治学态度、诲人不倦的敬业精神以及对学生的鞭策鼓励谆谆教诲,令我受益匪浅;同时,陈老师对科研事业的献身精神和实事求是的一贯作风,都将成为我学习的榜样。在此毕业论文完成之际,谨向导师致以最衷心的感谢和最崇高的敬意在论文的选题过程中,吴国良教授、宋尚伟副教授、胡青霞副教授、郑先波副教授、胡喜来副教授、叶霞副教授等都提出了宝贵的意见,尤其在论文的开题和试验研究的过程中,对试验过程中出现的问题和难题,冯建灿教授和谭彬副教授给予了宝贵的建议和精心的指导,再次谨向敬爱的老师们致以最真诚的的感谢在研究生的三年学习生活中,得到了园艺学院各位领导和老师的关心和帮助,在此我也表示衷心的感谢同时,三年的研究生课题研究过程中,师妹吴亚君也帮忙协助做了大量的工作,试验过程中也得到了张芳明、刘峄、连晓东等同学的鼎力帮助,在此表示衷心的感谢还要感谢父母在我求学生涯中给予我无微不至的关怀和照顾,一如既往地支持我、鼓励我感谢所有关心、支持和帮助我的老师、同学和亲友,感谢他们在我求学的过程中给予的极大地精神鼓励和无微不至的关怀,帮助我顺利完成学业郭晓丽2013年5月于郑州
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      上传时间:2019-03-18
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    • 简介:神农香菊DENDRANTHEMAINDICUMVARAROMATICUM为菊科菊属植物,是一种新的野生资源,其花、叶及根均具有浓郁的香气,民间常以其花、叶阴干作香囊。其花、叶有清热解毒的功效,是一种值得研究、开发、利用的药用植物新资源。本论文主要探讨了野生植物神农香菊组织培养及细胞悬浮体系的建立,为神农香菊的原生质体分离、纯化以及原生质体融合提供一定的理论基础。主要研究结果如下1、采用不同植物生长调节剂6BA和NAA组合对神农香菊丛生芽诱导的实验表明神农香菊的嫩茎比较容易诱导出丛生芽,以茎段为外植体,在含有6BA01MGL和NAA01MGL的培养基上不定芽诱导率可达90%,且腋芽长势良好,平均每个外植体可以产生87个不定芽;培养基为MS6BA03MGLNAA01MGL时,较适宜神农香菊丛生芽的继代培养;在6BA和NAA的不同组合处理时,神农香菊均能生根,但是在MSNAA03MGL培养基中根最长,达58CM,数量最多且根最粗壮,在其它配方中,根较细长柔弱,生根率较低。2、以花器官不同组织部位为外植体,通过愈伤组织途径建立无菌培养体系,结果表明诱导花瓣愈伤组织的最佳培养基为MSNAA02MGL6BAL5MGL诱导花托愈伤组织的最佳培养基为MS6BA20MGLNAA02MGL。采用不同发育时期的神农香菊花托作为外植体进行组织培养,成功诱导了愈伤组织,花托处于显蕾初期,诱导分化效果较好;处于同一时期的花托,诱导分化率随着直径的增大而降低,直径越小,形成愈伤组织速度越快,诱导分化效果越好;诱导花梗愈伤组织的最佳培养基为MSNAA01MGL6BAL0MGL2,4D20MGL花药在MS6BA20MGL2,4D10MGL,蔗糖浓度为6的培养基上诱导出愈伤组织,然后转接到MS6BA05MGLNAA02MGL培养基上产生的不定芽数量最多。各种花器官外植体诱导愈伤组织由易到难依次为花托花药花梗花瓣。NAA可以增强其生根的效果,浓度以03MGL为宜,移栽成活率达80以上。3、神农香菊不同外植体对愈伤组织诱导有很大的影响,其中无论是愈伤诱导率、愈伤长势还是愈伤硬度,茎段的为最佳的外植体,诱导率虽然不是最高,但是其硬度最低,且长势都好于其他外植体。在添加BA02MGL和2,4D10MGL的培养基上诱导率达到100。培养基为MSNAA01MGL6BA05MGL时,愈伤诱导成芽率最高,达867。4、愈伤组织接种在液体培养基MSBA02MGL2,4D05MGL上,愈伤组织的生长量最大,2G愈伤接种18D后鲜重达到812G。细胞悬浮培养过程中,悬浮培养物的鲜重、PH和蔗糖浓度都发生了一定的变化,其生长曲线呈“S”型增长,存在生长延滞期、对数生长期、停滞期;PH值的变化呈现一直下降趋势,但是可以一直保持在40以上,可以维持细胞生长酸度;蔗糖浓度也呈现下降趋势,主要是因为在细胞生长过程中要消耗大量的糖所致。
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      上传时间:2019-03-18
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    • 简介:西南大学二零一三届硕士学位论文超量表达BOFLCATFT对芥菜开花期及抗寒性的影响学科专业蔬菜学研究方向蔬菜遗传育种与生物技术指导老师宋洪元研究员论文作者杨海鹏中国重庆2013年05月目录目录摘要IABSTRACTIV第1章文献综述111植物开花途径1111自主途径AUTONOMOUSPATHWAY1112光周期途径PHOTOPERIODPATHWAY2113赤霉素途径加BERELLINPATHWAY2114春化途径VERNALIZATIONPATHWAY312低温胁迫与信号转导4121低温胁迫下植物的反应4122低温胁迫与信号转导413植物开花与抗寒之间关系。614FLC、刀结构功能及在转基因植物中的应用7141FLC、刀结构功能7142FLC、刀在转基因植物中的应用7143其他开花在转基因植物中的应用9第2章引言。1121研究目的意义1122研究技术路线12第3章材料和方法1331实验材料、药品及仪器13311植物材料与表达载体13312试剂及药品13
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      上传时间:2019-03-16
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    • 简介:沟叶结缕草(ZOYSIAMATRELLALMERR)又名马尼拉,是一种优良的暖季型草坪草,被广泛应用于暖温带及过渡地区。因其无法产生种子,故在自然界通过匍匐茎进行无性繁殖,无法采用杂交育种等传统方法进行遗传改良。因此,转基因及体细胞无性系变异等生物技术在沟叶结缕草育种、抗性和观赏性改良中有着重要的作用。本试验以继代了8年的沟叶结缕草匍匐茎所诱导的胚性愈伤组织为材料,比较了不同生长调节剂(BA和ZR)及其浓度(000、005、010、020、040MGL)组合、不同氨基酸种类(LPRO、LARG、LGLU)、不同固化剂种类PHYTAGEL、GELZAN、AGAR、CARRAGEENAN、AGARGELLAN、不同接种大小1、2、3、4MM、不同培养容器(柱形瓶、三角瓶和培养皿)以及不同辐射剂量0、20GY的60COΓ射线对愈伤组织再生的影响,以优化沟叶结缕草胚性愈伤组织的再生条件。同时,对愈伤组织再生过程进行了超微结构观察以更深入了解其再生。主要研究结果如下1沟叶结缕草胚性愈伤组织再生率随着生长调节剂的改变而发生明显改变,随着生长调节剂浓度从000提高至040MGL,胚性愈伤组织再生率在25%~700%之间变化。低浓度(005MGL)的BA能够刺激愈伤组织再生,而随着BA浓度的增加,愈伤组织的再生率显著降低另一方面,在未添加BA的培养基上,胚性愈伤组织的再生率随着ZR浓度的提高并未表现出显著性差异。结果显示在含有005MGL的BA和ZR培养基中,胚性愈伤组织的再生率达到最高700%,且平均总不定芽数最多1095。2含有500MGLLGLU培养基上其再生率180%与对照组的再生率300%未存在显著差异P>005,而添加同浓度LARG和LPRO显著抑制了愈伤组织的再生P<005,其中在含有LARG的培养基上再生率及再生力最低,分别为80%和745%。3在含不同固化剂的再生培养基上,胚性愈伤组织的再生力差异并不显著。AGARGELLAN上的胚性愈伤组织显示最高的再生率390%,AGAR及CARRAGEENAN培养基上的愈伤组织再生率分别为320%、270%,与AGARGELLAN上并无显著差异P>005,然而,常用的PHYTAGEL培养基上愈伤组织再生率仅为190%,此外,无论是SIGMA公司还是CPKELCO公司,所产的GELZAN都显示出较低的再生率(分别为210%、120%)。4试验结果显示,当胚性愈伤组织接种直径分别为1MM、2MM、4MM时,再生率没有显著差异,分别为210%、190%、180%,与接种直径为3MM的胚性愈伤组织的再生率680%具有显著性差异。5试验在柱形瓶中观测到最高的再生率640%,与三角瓶70%和培养皿130%中的具有显著性差异,而三者再生力之间并无显著性差异。6辐射剂量为20GY时,胚性愈伤组织具有更强的细胞分裂能力,膨大至5MM的愈伤组织小块能达到950%,远远大于未经辐射的胚性愈伤组织800%。但其胚性愈伤组织的再生率200%显著P<005低于未经辐射处理的愈伤组织710%。7电镜扫描显示沟叶结缕草胚性愈伤组织发生属于体细胞胚发生途径,其过程与狗牙根等暖季型草坪草的发生相似。电镜观察发现,胚性愈伤组织结构紧密,细胞较小,细胞内含物丰富,细胞代谢旺盛,且胚性愈伤组织在分化过程中细胞形态存在很大差异。
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      上传时间:2019-03-16
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    • 简介:2014MASTERTHESISOFSOUTHWESTUNIVERSITYECTOPICEXPRESSIONANALYSISANDCITRUSTRANSTORMATIONOILLMONOLNN●NT●■1UDPGLUCOSYLTRANSFERASEGENECITLGTDISCIPLINECELLBIOLOGYDIRECTIONCROPGENETICSANDBREEDINGSUPERVISORPROFCHENSHANCHUNASSOIATEPROFZOUXIUPINGCANDIDATEMAYUANYUANCHONGQINGPRCHINAMAY2014目录摘要IABSTRACTIII第一章文献综述111柑橘产业现状L12橙汁加工业现状213我国橙汁加工业面临的难题。2131橙汁加工用果实的品质要求一3132橙汁加工中的“延迟苦味”现象314橙汁脱苦技术研究进展5141物理化学脱苦工艺5I42基因工程脱苦~515柠檬苦素类似物糖基转移酶基因CF圮GR的研究进展616外源基因在植物体内的表达调控7I61提高外源基因在植物体内表达的策略7I62降低或抑制基因表达的方式8第二章引言II2I研究的目的与意义I122主要技术路线图13第三章材料和方法1531材料、仪器与试剂15311载体、菌株、材料153I2主要仪器153I3试剂153I4溶液163I5培养基1832实验方法19321目的基因的获得19322超量表达载体P35SCITLGT的构建22323RNA干扰表达载体的构建2L324只含有INTRON的P35SINTRON载体的构建22
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      上传时间:2019-03-16
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    • 简介:东北林业大学博士学位论文黑木耳分级多糖抗氧化活性及其相关生理功能研究姓名赵鑫申请学位级别博士专业森林植物资源学指导教师王振宇201106东北林业大学博士学位论文糖的抗辐射和抗疲劳功能主要是通过发挥其抗氧化作用来实现的。本文的研究结果为黑木耳多糖在医药、功能保健品、化妆品等领域的应用奠定了基础。关键词黑木耳分级多糖;抗氧化;生理功能
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      上传时间:2019-03-15
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    • 简介:UNIVERSITYCODE10635STUDENTNUMBER112010326002223DISSERTATIONFORMASTER’SDEGREEOFSOUTHWESTUNIVERSITYGENETICANALYZINGOFTHEMUTANTMATERIALWITHSTIGMAEXPOSEDINBRASSICANAPUSLCANDIDATEXIEQINGSUPERVISORPROFESSORJIANALIMAJORCROPGENETICSANDBREEDINGDIRECTIONTHEORYANDMETHODOFCROPBREEDINGCHONGQINGCHINAMAY2013目录目录摘要ABSTI’ACT第一章文献综述111引言L12突变体的获取方式2121自然发生2122物理诱变方式2123化学诱变3124插入诱变313植物花发育研究现状概述4131植物花器官发育控制模式4132植物MADSBOX基因研究进展8133花器官发育模型研究的前景814油菜花发育的研究进展9141花的形态构建9142拟南芥成花转变的分子模式9143花器官形态发生1015基因定位和克隆的方法11151图位克隆的方法12152拟南芥基因的图位克隆12153图位克隆技术中所用的分子标记13154BSA法在图位克隆中的运用。1516拟南芥的SAM相关基因的表达调控1617开题设想17第二章材料和方法21材料L922方法19221田间观察19222显微结构观察19223切片观察19224花粉涂片观察20225突变性状的育性观察。20226田间杂交和F2遗传群体构建21227油菜基因组总DNA的提取21228微卫星标记SSR筛选21229遗传作图。22
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      上传时间:2019-03-15
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    • 简介:UNIVERSITYCODE10225REGISTERCODES11163DISSERTATIONFORTHEDEGREEOFMASTEREDNALIBRARYCONSTRUCTIONANDEXPRESSEDSEQUENCETAGSESTANALYSISOFTHERIPENINGVITISAMURENSISSHUANGHONGBERR3SKINSURENSLSCVHONABERRYKANSCANDIDATESUPERVISORASSOCIATESUPERVISORACADEMICDEGREEAPPLIEDFORSPECIALITY’DATEOFORALEXAMINATIONUNIVERSITYLIFENGPROFWANGJUNYANGCHENGJUNMASTERFORESTPLANTRESOURCESCIENCENORTHEASTFORESTRYUNIVERSITY摘要摘要山葡萄是东北地区酿造葡萄酒的主要原料,用山葡萄酿造的葡萄酒口味独特,深受国内外消费者的欢迎。为了研究山葡萄成熟过程中相关基因的表达情况,鉴定出与山葡萄成熟、香气物质形成、花色苷合成及抗病相关的基因,进行了以下研究通过三种RNA提取方法提取山葡萄成熟果皮的总RNA,其中改良的CTAB法能分离出高质量的RNA,可以用于下一步的分子生物学研究。以山葡萄成熟果皮为材料,采用CREATORSMARTTMCDNALIBRARYCONSTRUCTION技术构建了CDNA文库。经鉴定,文库的库容量为1001X106,重组率为94%,插入片段在02520KB之间。经随机测序,获得935条有效EST,聚类拼接后得到636条单基因簇UNIGENES,包括108个重叠群CONTIGS和528个单拷贝SINGLETS。这些数据为今后山葡萄功能基因的分离克隆和功能基因组学的研究奠定了基础。EST分析结果表明,文库中未知功能基因FUNCTIONUNKNOWN占1792%,控制代谢METABOLISM的基因为2081%,与细胞救援与防御CELLRESCUE,DEFENCE相关的基因为515%,信号转导SIGNALTRANSDUCTION基因为468%,能量ENERGY相关基因为561%,蛋白合成PROTEINSYNTHESIS相关基因为959%,蛋白活性调节PROTEINACTIVITYREGULATION基因为1543%,细胞结构CELLSTRUCTURE基因为912%,控制运输TRANSPORT基因为655%,转录TRANSCRIPTION基因为515%。在文库中,核糖体蛋白的数量最多,为28个,占全部EST序列的538%,有比较多的核糖体蛋白说明在山葡萄果皮生命活动过程中,蛋白质合成活动旺盛。文库中与花色苷合成相关的基因包括查尔酮合酶CHALCONESYN_TLLASE,CHS、类黄酮3’,5’羟化酶FLAVONOIDFLAVONOID3’,5HYDROXYLASE,F3芍H、苯丙氨酸解氨酶PHENYLALANINEAMMONIALYASE,PAL、谷胱甘肽S转移酶GLUTATHIONESTRANSFERASES,GST等,这些基因都与已知基因或者基因家族有高度相似性E。L∞80%。文库中与香气物质形成相关的基因主要有脂肪氧化酶LIPOXYGENASE、苯丙氨酸解氨酶PHENYLALANINEAMMONIA1YASE、醇脱氢酶ALCOHOLDEHYDROGENASE等8个酶基因,与成熟相关的基因有多聚半乳糖酶POLYGALACTURONASE、成熟相关蛋白鲥P22RIPENINGRELATEDPROTEINGRIP22、果胶酶PECTINESTERASE、脂肪氧化酶LIPOXYGENASE。根据已有的文献资料,从山葡萄成熟果皮的CDNA文库中挑选了23个和山葡萄抗病相关的基因,为以后更好的研究山葡萄的抗病机制提供了基础。关键词山葡萄;EDNA文库;表达序列标签
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    • 简介:独创性声明本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果,文中己加了特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁在文中作了明确说明并表示衷一D感谢。,、学位论文作者彳眵子签字日期Ⅻ侈年G月乡日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院筹可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。,保密的学位论文在解密后适用本授权书,本论文日,不保密,口保密期限至年月止。学位论文作者签名研砀去签字日期Ⅻ彦年6月多日锄鼢研铷签字日期沙汐/乡年多月乡日34结果与分析21341PMADS20的克隆的全长序列获得2L342矮牵牛PMADS20基因EDNA的序列特征22343P删D船D基因进化树分析2235讨论23第4章矮牵牛PMADS20基因的表达分析2541实验材料与试剂25411实验材料25412试剂盒及主要设备2542实验方法25421总RNA的提取25422EDNA第一链合成25423PMADS20基因表达特性分析2543结果与分析26431总RNA提取26432PMADS20基因表达特性分析27433PMADS20表达的实时荧光定量分析3044讨论31第5章植物超表达载体、融合沉默载体构建与转化矮牵牛研究3351实验材料与试剂33511植物材料33512菌株载体33513主要仪器设备33514试剂盒及主要试剂33515常用试剂配制34516常用培养基配方3452实验方法34521植物材料的培养。34522构建P蚴D舵D中间克隆载体35523构建PMADS20植物表达载体36523农杆菌感受态制备、转化37524电击杯的处理及农杆菌电转化感受态细胞的转化37525农杆菌介导的遗传转化38526转基因矮牵牛的检测。39
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    • 简介:早熟是油菜育种改良的目标性状之一。近年来,随着现代生物技术的飞速发展与成熟,农杆菌介导的转基因技术广泛地运用在油菜上,但转化效率受到众多因素的影响,因此建立和完善一套稳定高效的再生和遗传转化体系非常重要。本文以甘蓝型油菜品种‘浙双758’等为研究材料,探讨了油菜再生和遗传转化体系中的相关问题,并对转基因苗进行了初步的PCR鉴定,取得的主要研究结果如下1以子叶柄为外植体油菜再生体系的改进与完善。在本试验室研究基础上,进一步研究了切下子叶柄外植体时油菜的苗龄,常用外源激素的浓度及配比组合对子叶柄外植体再生频率的影响。试验结果表明,甘蓝型油菜不同品种的芽再生率和苗龄的关系走势大致相同,均随着时间的增加,苗龄越老,芽分化频率也随着快速下降,但下降的趋势和时间不完全相同。‘浙大619’最佳苗龄为播种后的第6天,此时再生率最高为65%,‘浙双758’和‘浙双72’最佳苗龄均为播种后第5天,芽的再生率分别为68%和65%。研究中还发现苗龄为10天时,三个品种的子叶外植体都基本不能再分化出再生芽,故用于再生的外植体不宜太老,应掌握好最佳的时间。在诱导愈伤的培养基上,2,4D在低浓度范围下,诱导愈伤组织的能力随着2,4D浓度的增加而增加,诱导的愈伤组织膨大呈绿色,致密当2,4D浓度超过一定范围后,愈伤组织的诱导率反而下降,并且诱导出的愈伤组织有的呈白色,在后续的再分化中不能正常分化出健康的再生芽而本试验中采用低浓度的2,4D和6BA组合的预培养基,愈伤组织的分化情况好,分化的愈伤正常,愈伤的诱导率比2MGL2,4D的预培养基要高,根据实验结果,最佳预培养基为MS1MGL2,4D1MGL6BA。在再生植株生根上,添加一定浓度的NAA对再生植株根的再生有显著的促进作用。当NAA超过一定浓度后,促进作用下降,但未达到抑制水平,试验结果显示最佳的生根培养基为12MS01MGLNAA。KAN对再生植株的生根有一定的影响,会影响正常的生根,试验中应选择低浓度、且影响相对较小的KAN来筛选转化的植株。2、农杆菌介导的甘蓝型油菜子叶柄外植体遗传转化体系的建立。试验结果表明同一种抗生素同一浓度对带有目的基因的农杆菌LBA4404和EHA105的抑制效果不同,并且抑制效果随着抗生素浓度的升高而增大不同的抗生素对带有目的基因的农杆菌的抑制效果也不同。用农杆菌EHA105转导目的基因到油菜,发现用抗生素抑菌较困难,易发生农杆菌污染,而LBA4404则可用抗生素很好地抑制住。转化体系中选用农杆菌LBA4404介导,抗生素用500MGL的特美汀。对于农杆菌侵染的时间和浓度的研究表明,油菜子叶柄外植体的褐化程度和污染率随着农杆菌侵染的菌液浓度和时间的增大而升高,高浓度或者长时间的菌液侵染子叶柄外植体,可能造成外植体全部褐化,并且在分化培养阶段500MGL的特美汀控制不住农杆菌的生长,导致外植体全部污染褐化死亡。选择农杆菌LBA4404菌液浓度为OD60002时,褐化程度轻,抗性芽率也较高,农杆菌也容易控制,不会发生爆长的情况,在农杆菌LBA4404的OD600值为02时试验中选择60S的侵染时间较好。在KAN的敏感性试验中,发现KAN对油菜子叶柄的再生有抑制作用,愈伤组织的诱导率随着KAN浓度的增大先下降后又上升,说明高浓度的KAN能促进子叶柄外植体愈伤组织的形成,但此时的愈伤是不正常的愈伤,愈伤组织色白坚硬,愈伤膨大到一定程度后生长势变弱,之后基本不能再进行正常绿色芽的分化,只能分化出一些白化、半白化和紫色的再生苗。综合各种因素,试验中宜选择含有15MGLKAN的培养基进行转化和筛选。3、获得了农杆菌介导经过PCR初步鉴定为阳性的转基因植株。‘浙双758’子叶柄外植体愈伤组织经农杆菌侵染后进行抗性筛选及PCR验证获得的转基因植株。
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    • 简介:独创性声明学位论文题目监擅过氢丝堑鳖篮生盛蛋鱼基圈Q旦型2鲍直隆丞丝自L塑生佥堑本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果,文中已加了特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、同仁在文中作了明确说明并表示衷心感谢。学位论文作者越每CIFL/签字日期劢,3年岁月罗J日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规定,有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院筹可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。保密的学位论文在解密后适用本授权书,本论文晒不保密,口保密期限至年月止。学位论文作者签名赵每辔Y导师签名害赢幻含利3。弦签字日期训哆年岁月≥F日签字日期ⅫF年6月/,日目录摘要IABSTRACT。III第1章文献综述111植物过氧化物酶体概况112过氧化物酶体的功能113过氧化物酶体参与的反应~214过氧化物酶体的生物发生2141过氧化物酶体的分裂与增殖214,2过氧化物酶体蛋白的合成与运输315PEX22基因的功能616H202的非生物胁迫6161H202的降解6162非酶促降解途径7163酶促降解途径717ABA的作用7第2章引言92。1研究背景和意义922技术路线10第3章蜡梅CPPEX22基因的克隆和序列特征分析1131实验材料与试剂11311蜡梅花及蜡梅花EDNA文库LL312菌株与载体11313主要仪器设备11314主要化学试剂1131。5常用自配试剂11316基本培养基1232实验方法123。21EST序列特征分析12322CPPEX22基因EDNA的获得13323CPPEX22基因的生物信息学分析1633结果与分析17331CTAB法提取蜡梅的基因组DNA17
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    • 简介:结球甘蓝(BRASSICAOLERACEALINNVARCAPITATADC),简称甘蓝,属于十字花科(CRUCIFERAE)芸薹属(BRASSICA)的两年生草本植物,世界各地均有栽培,是一种重要的叶用蔬菜类作物。植物生长发育过程中存在着保守的表观遗传调控机制,其中最重要的一种组蛋白修饰就是赖氨酸组蛋白甲基化,主要由一类含有SET结构域的基因家族修饰,在真核生物中广泛存在。植物SET结构域基因功能复杂,它们参与蛋白甲基化,影响染色体的浓缩和分离以调控染色体结构,还参与基因的转录调节、调控基因表达等众多的细胞反应过程,对植物的生长发育起着重要的作用。本研究通过生物信息学分析方式,对SET结构域基因家族的基本信息(长度、分子量、等电点等)及染色体定位、结构域分布、基因结构、基因的系统进化等进行分析。同时,对SET结构域基因在结球甘蓝“BO0112B”不同发育时期、不同器官中的时空表达图谱进行分析。结果表明1结球甘蓝基因组中共有29条SET结构域基因,这些基因不均匀的分布在甘蓝9条染色体上,尤其1号染色体上没有SET结构域基因。29条SET结构域基因开放阅读框及编码的蛋白长度各异,最长的BOL027564基因开放阅读框长5088BP,编码1695氨基酸残基,而最短BOL044707基因开放阅读框为405BP,编码134氨基酸残基。从基因结构来看,内含子最少有0个,最多超过20个。其中16条SET结构域蛋白呈碱性。2结球甘蓝中SET结构域基因的系统进化分析,结合其他保守结构域的分布,甘蓝中29条SET结构域基因家族可分为7个分支。第I分支保守结构域模型为SANTSET,第II分支保守结构域模型为AWSSETPOSTSET,第III分支保守结构域模型为PWWPPHDPHDSETPOSTSET,第IV分支保守结构域模型为PHDSET,第V分支保守结构域模型为SRAPRESETSET,第VI分支的结构域模型为SETPOSTSET,第VII分支只含有SET一个结构域。37条SET结构域基因(BOL040761BOL030053BOL042363BOL043727BOL025176BOL027607BOL011910)在结球甘蓝的荧光定量表达分析表明,SET结构域基因在根、茎、花蕾、花中均有表达,在叶中不表达。其中在花蕾中表达量最高,根中次之。在不同发育时期花蕾的半定量表达分析中,SET结构域基因普遍在花粉母细胞时期高度表达。
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